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ELISA實驗的具體步驟

更新時間:2023-11-13點擊次數:1571

酶聯免疫吸附測定(enzyme linked immunosorbent assay,簡寫ELISA)指將可溶性的抗原或抗體結合到聚苯乙烯等固相載體上,利用抗原抗體特異性結合進行免疫反應的定性和定量檢測方法。ELISA是分子生物學、免疫學和細胞生物學研究中常用到的實驗操作之一,一起來了解一下ELISA實驗的具體步驟吧!

1. 涂覆:將待檢測的抗原或抗體溶液加入到微孔板(通常是96孔板)中,并在孔板表面上形成一層固定的抗原或抗體。這個過程被稱為涂覆。

2. 阻斷:為了防止非特異性結合,需要在涂覆后加入一種阻斷劑,例如牛血清蛋白(BSA)或牛奶粉,以覆蓋孔板上未被固定的表面。阻斷劑可以減少非特異性結合和降低背景信號。

3. 樣品加入:將待測樣品加入到微孔板中,樣品中的目標抗原或抗體與固定在孔板上的抗體或抗原相互作用。

4. 洗滌:通過反復洗滌孔板,去除未結合的物質,以減少背景信號。

5. 探針加入:加入與待測物體特異性結合的酶標記二抗(例如辣根過氧化物酶-HRP)或酶標記抗原,使其與樣品中的目標物體結合。

6. 洗滌:再次洗滌孔板,去除未結合的酶標記物。

7. 底物加入:加入一種底物,其與酶標記物相互作用,產生可測量的信號。常用的底物是一種可被酶催化產生顏色或熒光的物質。

8. 反應停止:通過加入一種停止劑,停止底物的反應,阻止信號進一步增加。

9. 信號測量:使用光譜儀或熒光測量儀測量底物反應產生的信號,根據信號的強度來確定樣品中目標物體的濃度。

本期內容:ELISA實驗的具體步驟

下期內容:ELISA空白背景高的常見原因和處理方法



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