亚洲第一视频网,久久91精品国产99久久yfo,国产精品一区二区三区免费,成人欧美一区二区三区黑人,在线观看国产精品入口,亚洲人一区

歡迎進入柏萊源(天津)生物科技有限公司網站!
13302035784
技術文章

TECHNICAL ARTICLES

當前位置:首頁  -  技術文章  -  細胞凍存的步驟與注意事項

細胞凍存的步驟與注意事項

更新時間:2024-05-08點擊次數:722

為什么培養的細胞要凍存?凍存的通用步驟是什么?有什么注意事項?以上三個問題就是本期我們要探討的內容,

為什么要凍存?

首先,細胞培養過程中,考慮到細胞株傳代次數逐漸增加后,細胞變異的可能性將增大,繼續培養的話細胞株可能會出現老化、狀態下降、丟失一些該細胞的特性的現象,對后續實驗造成影響;

此外,如果該細胞株特別珍貴,屬于實驗室重要資源,對細胞進行大規模的保存,能有效降低課題項目執行的風險;

最后,就是常見的風險規避問題,正所謂人有失手、馬有失蹄,再熟練的實驗操作者、再厲害的實驗設備也是有出問題的可能,一旦出問題,意味著細胞資源的損失。

基于以上幾點,細胞凍存對于一個實驗室或個人來說,是非常必要的操作。

細胞凍存的通用步驟

既然了解了凍存的必要性,接下來我們講一下凍存細胞的通用步驟。這個步驟適用于絕大多數的細胞以及絕大多數的實驗室環境,它并不需要特別的試劑耗材。

當細胞培養至對數生長期晚期,但未進入平臺期之前,也就是生長密度達到90%以上未到100%之前,此時貼壁生長的細胞依然處于單層細胞狀態。將該細胞消化,并進行計數。

1a8d877da7d09b8e28c5c03a2463737d.png 

然后通過調整細胞懸液體積,將細胞密度調整為2X10^62X10^7/mL。與此同時,使用細胞培養級別的DMSOwan全培養基混合,配制凍存液,凍存液成分的體積比應該為DMSO20%wan全培養基80%

將配置好的凍存液與細胞懸液按照體積1:1的比例進行混合,轉移到凍存管內,做好標記,完成密封。

接下來,按照4度半小時、-20度一小時、-80度過夜的順序逐步將凍存管的溫度下降。

如果實驗室內有程序降溫盒,則可以直接將凍存管放入盒內,實現溫度的穩步下降。最后,將凍存管從-80度轉移至液氮罐內,進行長期保存。

細胞凍存的注意事項

1 在凍存之前,確保細胞狀態良好。包括:細胞生長密度符合上述規定、細胞無污染、細胞形態良好沒有變異。

2 DMSO可以溶解部分濾膜,如果要進行過濾,應該選擇不會被DMSO降解的濾器,并且操作時務必帶手套。

3 凍存管的管蓋并不是擰得越緊越好,因為管蓋內有O型橡膠圈,擰得太緊會讓其變形,造成泄漏。當然,太松也會泄漏。

4 細胞凍存的密度應該要比傳代時的密度要高得多,假如傳代時的密度是1X10^?5/mL,那么凍存時可以將密度提高到100倍。

等到了復蘇后,再將密度稀釋為1/20也依然能保持較高的生長密度,但與此同時,殘留的DMSO對細胞的影響則會大大降低。

5 凍存應遵循慢凍,復蘇則相反,應快速升溫。慢凍的原因是為了避免降溫時,細胞內的水分還未來得及脫離細胞,但卻形成冰晶,對細胞造成損傷。

但也要注意,慢凍不等于無限制的緩慢降溫,因為太慢,也會促成水分形成冰晶。理想的降溫速度應該是1/分鐘的下降速度。

533ba3980df1b9e98a89933ee9b830d5.png 

D2650是一款由Sigma公司生產的二甲基亞砜(DMSO)化學試劑,該產品具有多項顯著的優勢。

首先,D2650是一種高極性、高沸點的非質子溶劑,具有出色的熱穩定性,可以溶于水以及乙醇、丙醇、苯和氯仿等大多數有機物。這種廣泛的溶解性使其被譽為“萬能溶劑",為各種化學反應提供了便利。

其次,D2650在生物領域的應用非常廣泛。它可以用作細胞冷凍保護劑,能保護細胞免受冰晶導致的機械損傷。在細胞培養中,D2650被廣泛應用于原代、繼代培養和重組的異倍體和雜交瘤細胞系、胚胎干細胞以及造血干細胞的凍存。同時,由于其優秀的溶解性和穩定性,D2650還可以用于聚合酶鏈式反應(PCR)等化學反應。

再者,D2650的產品質量得到了嚴格的保證。它經過了無菌過濾(0.2微米)及內毒素水平檢測,保證了產品的無菌性和內毒素含量低。同時,Sigma公司的質量管理體系保證了D2650的高品質,使得用戶在使用時可以放心。

此外,D2650還以其即用型凍存液的形式,為用戶提供了便利。這種凍存液無需添加血清或蛋白質,也不含動物成分,使得它在各種細胞培養中的應用更加廣泛。同時,D2650的生產過程符合cGMP標準,采用了USP/最高質量的成分,進一步保證了其品質。

綜上所述,D2650這款化學試劑以其出色的溶解性、熱穩定性、生物應用廣泛性和高品質等特點,成為了科研和工業生產中的重要工具。無論是用于化學反應還是細胞培養,D2650都能提供優秀的性能和可靠的品質。

柏萊源生物提供Sigma品牌的D2650化學試劑,價格美麗!當日發貨!歡迎咨詢哦!

以上就是有關細胞凍存的步驟與注意事項,柏萊源生物預祝您試驗成功!


2473262194

TEL:13302035784

微信咨詢