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CCK-8試劑盒進行細胞增殖檢測的步驟是怎樣的?

更新時間:2023-11-30點擊次數:1158

CCK-8試劑盒是一種基于WST-8的試劑盒,用于細胞增殖和細胞毒性的快速、高靈敏度檢測等,具有使用方便,檢測快速,靈敏度高,重復性優于MTT法,毒性小,適合于高通量藥物篩選等大規模實驗應用的優點。以下是使用CCK-8試劑盒進行細胞增殖檢測的步驟:

一、細胞增殖分析

1.培養細胞并將其接種到96孔板中。

2.在37℃、5% CO2、90%濕度條件下培養24小時。

3.配制不同濃度梯度的樣本溶液,如300、100、33.3、11.1、3.7、1.2、0.4、0.14uM。

4.每個濃度三個復孔加入到96孔板中,在37℃、5% CO2、90%濕度條件下培養適當時間長度。如6,12,24或48小時。

5.在CCK-8試劑盒中加入10μL的CCK-8溶液。

6.在37℃、5% CO2、90%濕度條件下培養0.5-4小時。

7.用酶標儀在450 nm處測量吸光度。

8.用Excel及Graphpad Prism處理并分析結果。

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二、細胞毒性分析

1. 制備細胞懸液:細胞計數

2. 接種到96孔板中:根據合適的鋪板細胞數,每孔約100ul細胞懸液,同樣的樣本可做3個重復。

3. 37℃培養箱中培養:細胞接種后貼壁大約需要培養2-4小時,如果不需要貼壁,這步可以省去。

4. 加入不同濃度的毒性物質

5. 37℃培養箱中培養:加入毒性物質的培養時間,要看毒性物質的性質和細胞的敏感性,一般要根據細胞周期來決定,起碼要一代以上的時間。

6. 加入10ulCCK8:由于每孔加入CCK8量比較少,有可能因試劑沾在孔壁上而帶來誤差,建議在加完試劑后輕輕敲擊培養板以幫助混勻。

7. 培養1-4小時:細胞種類不同,形成的Formazan的量也不一樣。如果顯色不夠的話,可以繼續培養,以確認最佳條件。特別是血液細胞形成的Formazan很少,需要較長的顯色時間(5-6小時)。

8. 測定450nm吸光度:建議采用雙波長進行測定,檢測波長450-490nm,參比波長600-650nm。


本期內容:CCK-8試劑盒進行細胞增殖檢測的步驟是怎樣的?

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