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TECHNICAL ARTICLES
ELISA素來以靈敏度較高、特異性較好的特點在臨床上得到了廣泛的應用。而它作為經典的免疫檢測方法，雖然看似平常但是要真正將該實驗做好并不容易，酶標板的讀值總是會不盡如人意，可見實操中的各個環節對該實驗的檢測效果影響較大，如不注意，就會產生一些糟心的實驗結果。跟小源一起來總結一下ELISA空白背景高的常見原因和處理方法吧!常見原因有以下這些：1）洗板不干凈解決方法：①充分洗滌：如果洗板的時間不夠，會導致抗體殘留，陰性對照會顯色，嘗試延長洗板時間，增加洗板頻率，在洗液中添加表面活...
酶聯免疫吸附測定（enzymelinkedimmunosorbentassay，簡寫ELISA）指將可溶性的抗原或抗體結合到聚苯乙烯等固相載體上，利用抗原抗體特異性結合進行免疫反應的定性和定量檢測方法。ELISA是分子生物學、免疫學和細胞生物學研究中常用到的實驗操作之一，一起來了解一下ELISA實驗的具體步驟吧！1.涂覆：將待檢測的抗原或抗體溶液加入到微孔板（通常是96孔板）中，并在孔板表面上形成一層固定的抗原或抗體。這個過程被稱為涂覆。2.阻斷：為了防止非特異性結合，需要在...
轉染是將外源性核酸（DNA或RNA）采用各種化學、生物學或物理方法導入細胞，從而實現對細胞基因功能的蛋白質表達研究。生成重組蛋白，或特異性地增強或抑制轉染細胞中的基因表達是轉染實驗的主要目的。因此，轉染是一種功能強大的分析工具，可用于基因或基因產物的功能和調控研究，用于生成轉基因生物，并可用作基因治療方法。常規的轉染技術主要分為瞬時轉染和穩定轉染，怎么選擇瞬時轉染和穩定轉染呢？選擇瞬時轉染還是穩定轉染，具體取決于您要開展的實驗的時間范圍和最終目標。瞬時轉染細胞一般在轉染后24...
轉染細胞的方法有很多，這里介紹一種比較經濟實用的轉染試劑--聚乙烯亞胺(即PEI)。PEI（polyethylenimine）是一種帶有高電荷陽離子的多聚物，非常容易結合帶負電荷的DNA分子，形成復合物，并轉染到貼壁和懸浮細胞中，常用于大規模瞬時轉染表達。在HEK293和CHO等細胞中轉染效率較高。那么如何利用PEI轉染細胞呢？實驗前準備：PEI(polysciences,Cat#:24765-1),將PEI配置成1ug/ml，用0.2μm濾膜過濾，并分裝儲存于負80度。實驗...
Co-IP（免疫共沉淀，co-inmunoprecipitation）是經典的利用抗體從樣品中捕獲靶蛋白及其互作蛋白、復合體的一項技術，能夠特異性富集所研究的目的蛋白。免疫共沉淀Co-IP實驗步驟細胞轉染1.鋪細胞，轉染細胞。本次轉染的兩個蛋白分別帶有FLAG和HA標簽。裂解細胞2.去除培養基，PBS吹下細胞，離心去上清。將細胞沉淀轉移到1.5mlEP管中，PBS洗，離心去上清，加1ml裂解液。3.冰上孵育40min，每10min震蕩一次。4.超聲破碎細胞結構和打斷染色質。冰...
關于細胞轉染，有許多常用的轉染試劑。下面簡單介紹下Lipo3000轉染細胞的步驟及注意事項。實驗準備：Lipofectamine™3000轉染試劑、Opti-MEM（可以用無血清的培養基代替）實驗步驟：1.接種細胞，使其在轉染時達到70–90%匯合度。注：對于HEK293，6孔板一般鋪50萬個細胞左右。對于PC9,24孔板一般鋪5-10萬個細胞。由于不同細胞，生長狀況不太一樣，需要根據情況調整。2.使用Opti-MEM™培養基稀釋Lipofectami...
啟動子是一段位于結構基因5’-端上游區的DNA序列，能活化RNA聚合酶，使之與模板DNA準確地結合，并具有轉錄起始的特異性。基因的特異性轉錄取決于酶與啟動子能否有效地形成二元復合物。那啟動子有哪些特征？①序列特異性。在啟動子的DNA序列中，通常含有幾個保守的序列框，序列框中堿基的變化會導致轉錄啟動活性的改變。②方向性。啟動子是一種有方向性的順式調控元件，有單向啟動子和雙向啟動子兩類。③位置特性。啟動子一般位于所啟動轉錄基因的上游或基因內的前端。處于基因的下游或在基因的上游但離...
聚合酶鏈反應（PolymeraseChainReaction)簡稱PCR，是一種體外高效擴增特定DNA片段的分子生物學技術。該技術的發明人是KaryMullis，他從1983年開始研究PCR技術，1985年開始被逐漸采用，成為分子生物學的一項常規手段，并得到了廣泛的應用，在臨床診斷、生物醫學研究和法醫學領域都具有重要意義。PCR是在體外模擬體內DNA復制的過程，它用加熱的辦法讓需要擴增的DNA片段變性解鏈成兩條單鏈，人工合成的一對引物讓它們結合到DNA模板（分別結合到兩條鏈上...
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